Técnicas de muerte celular: Manual de laboratorio

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Título original:

Cell Death Techniques: A Laboratory Manual

Contenido del libro:

La muerte celular regulada, que interviene en casi todos los aspectos del desarrollo y la fisiología animal, puede ser difícil de estudiar en el laboratorio. Existen múltiples tipos de muerte celular, pueden activarse varias vías de señalización interconectadas y las consecuencias postmortem pueden variar. Por lo tanto, a menudo se requiere una combinación de técnicas especializadas para caracterizar y confirmar la muerte celular en el sistema de interés.

Este manual de laboratorio proporciona un conjunto completo de protocolos paso a paso para inducir, detectar, visualizar, caracterizar y cuantificar la muerte celular en diversos sistemas. Los autores describen estrategias para identificar y evaluar los cambios bioquímicos y morfológicos que se producen durante la apoptosis, la autofagia, la necrosis y otras formas de muerte celular, así como para identificar los genes y proteínas que pueden estar implicados. Los protocolos emplean citometría de flujo, obtención de imágenes y microscopía, RNAi, western blotting, mediciones de actividad enzimática y otras herramientas para evaluar fenómenos como la fragmentación del ADN, la permeabilización de la membrana lisosomal, el flujo autofágico, la formación de apoptosomas o ripoptosomas, la activación de caspasas y la liberación de citocromo c. Se describen técnicas tanto para sistemas in vitro como para modelos in vivo, incluidos ratones, C. elegans y Drosophila.

Los autores también proporcionan orientación sobre la interpretación y presentación de los resultados de los experimentos de muerte celular, así como consejos sobre los procedimientos complementarios que pueden ser necesarios para confirmar los resultados de un experimento determinado. Este recurso de laboratorio indispensable permitirá a todos los biólogos celulares y del desarrollo, a partir del nivel de postgrado, llevar a cabo y comprender con confianza una amplia gama de ensayos de viabilidad celular.